黑色中吸附酶標板在酶聯免疫吸附試驗中,參與免疫學反應的抗原、抗體、標記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強度、pH值和反應溫度、時間等條件起著關鍵作用。此外,作為載體的固相聚苯乙烯(Polystyrene)表面對抗原、抗體或抗原抗體復合物的吸附也起著重要作用。
抗原、抗體和其它生物分子通過多種機制吸附至載體表面,這包括通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動吸附,通過引入其它活性基團如氨基和碳基的共價結合,以及通過表面改性后的親水鍵結合。
黑色中吸附酶標板使用的具體步驟:
1、加樣品:將標本稀釋液加到包被板內,將需要檢測的血清用PBS或生理鹽水按照1:20的比例稀釋后取10ul加入到酶標板的反應孔內。
2、加對照:加入陰性對照3孔,陽性對照1孔,還有100ul的對照血清。
3、進行溫育:將反應板震蕩,使樣品充分的混勻,置于37℃的溫箱或者水浴反應20分鐘的時間。
4、洗板:用蒸餾水將洗滌液15ml稀釋至300ml的體積。手洗的時候應該將反應板孔內的容物傾出,將洗滌液注滿反應孔的位置,然后放置30秒鐘后用力甩去,這樣的動作重復5次后開始拍干。機洗需要進行5次,每孔注入洗滌液200ul或者可以注滿,然后停留30秒鐘后吸盡拍干。
5、加酶標工作液:在每孔內加入100ul的酶標工作液,放置到37℃的溫箱中,反應20分鐘后洗板5次,洗板的操作和上述步驟4是相同的。
6、這是反應的最后一步,就是顯色和終止反應:將底物50ul加到反應孔內,37℃條件下避光顯色10分鐘的時間。在每孔內加入終止液50ul混勻用以終止反應。